На сегодняшний день практически нет ветеринарного врача, который бы не был знаком с бабезиозом собак (пироплазмозом собак), и поскольку он неоднократно сталкивался с бабезиозом и вылечивал его, то, наверное, он может сказать, что хорошо знает это заболевание. И действительно, в отечественной литературе сложилось несколько устойчивых стереотипов относительно бабезиоза.
Бабезиоз легко диагностируется в острую стадию заболевания.
- На собаках паразитирует только один вид бабезий (пироплазм), который не поражает другие виды животных, а пироплазмы других видов животных не поражают собак.
- Пироплазмоз передается только через укусы клещей или при переливании крови.
- На ранних стадиях заболевания пироплазмоз легко лечится.
- Не леченые собаки, как правило, погибают.
- И следствие из 5 стереотипа – для пироплазмоза нехарактерно носительство.
Конечно, у каждого специалиста есть свои мнения и догадки относительно бабезиоза, но в отсутствии молекулярной диагностики эти догадки и мнения остаются только догадками и уделом меньшинства.
В процессе разговора о роли пироплазмоза как этиологического фактора лихорадки неясного генеза мы постепенно разберем, насколько сложившиеся стереотипы в отечественной имеют место быть на самом деле.
Номенклатура возбудителей пироплазмоза
Бабезиоз собак является широко распространенным во всем мире, клинически существенным, трансмиссивным, гемопротозойным заболеванием.
Разные виды бабезий часто называют пироплазмами, что является собирательным термином для рода бабезий и тейлерий. Эти два ряда возбудителей за последние 10 лет подверглись существенному генетическому исследованию, что привело к переклассификации и изменениям в токсономии этих паразитов. По международной классификации Babesia spp. соответствуют надсемейство Piroplasmida в пределах типа Apicomplexa.
В англоязычной литературе на основании величины бабезий при световой микроскопии говорят о «большом» пироплазмозе при обнаружении бабезий размерами более 3-5 μm, это такие бабезии, как B.canis; и «малом» бабезиозе – при обнаружении бабезий менее 3 μm, это такие бабезии, как B. gibsoni. Несмотря на кропотливое наблюдение за паразитами в мазках крови, в течение почти ста лет классификация пироплазм не шла дальше, чем классификация их по морфологическим особенностям и размерам. Впервые предложил классифицировать собачий пироплазмоз по клиническим признакам заболевания немецкий протозоолог Eduard Reichenow, который выявил серьезные различия в патогенности возбудителей, вызывающих пироплазмоз во Франции и на Севере Африки; наиболее вероятно, что сейчас эти пазариты известны как B. canis и B. rosi.
До 1980 года никаких новых изменений в номенклатуру бабезиозов внесено не было, и только с появлением молекулярных методов диагностики и молекулярного генотипирования возбудители бабезиоза собак были переклассифицированы.
Возбудитель бабезиоза собак B. canis был повторно классифицирован в три подвида – B. canis canis, B. canis rossi and B. canis vogeli. А на сегодняшний день на основании перекрестных иммунных реакций, серологического тестирования, векторной специфики и генетического родства, эти паразиты признаны независимыми видами. Все три паразита названы большими (крупными бабезиями, по ранее предложенной морфологической классификации), то есть вызывающими «большой пироплазмоз».
Четвертая крупная пироплазма, паразитирующая на собаках, выделена в Северной Каролине (США) от собак с клиническими и гематологическими признаками пироплазмоза. На сегодняшний день еще не классифицирована и определена как неклассифицированная крупная Babesia sp., изолят из Северной Каролины.
Виды пироплазм, паразитирующие на собаках
Последние исследования бабезиоза собак сосредоточены на определении таксономического статуса известных и недавно обнаруженных возбудителей бабезиоза, улучшении диагностических методов, раскрытия аспектов патофизиологии этого заболевания и поиск новых химиотерапевтических и иммуннопрофилактических протоколов.
На сегодняшний день признаются, по крайней мере, три возбудителя «малого» пироплазмоза у собак, они отличаются по клиническим и генетическим характеристикам. Это Babesia gibsoni, Babesia conradae (выделенные у больных собак на западе США и описанные в оригинальный исследованиях как “B. gibsoni”[13,14]) и Babesia microti–like (позже идентифицированной как Theileria annae) [15,16].
Кроме того, имеют сообщения о выделении из крови собак, больных бабезиозом, три разновидности Theileria. У небольшого числа собак в Европе были выделены Theileria (Babesia) equi и Theileria annulata [17,18]. И у 82 собак в Южной Африке была выделена неклассифицированная Theileria sp – Южноафриканская Theileria sp. [19].
Как и при решении многих других вопросов, касающихся таксономическими, не обошлось без разногласий при классификации пирплазм собак, особенно это касается так называемых малых пироплазм. Вся классификация на сегодняшний день построена на основании генетического родства между паразитами. Однако до сих пор, мало данных по жизненному циклу этих паразитов, особенностям их строения и особенно – по идентификации векторов передач.
При световой микроскопии интроэритроцитарные стадии Babesia spp. неразличимы от Theileria spp. (у кошек Cytauxzoon имеет такие же характеристики, но данных о том, что этот род может поражать собак, нет).
Исторически роды Babesia и Theileria были разделены на основании стадий жизненного цикла и трансовариальной передачи в клещах. [20]. Среди всех пироплазм, паразитирующих на собаках и кошках, доказана экстраэритроцитарная стадия (шизогония) в жизненном цикле Cytauxzoon felis у кошек.
Противоречие заключается в том, должны ли Babesia spp. и Theileria spp. классифицироваться на основании их естественного цикла в организме собак и клещей или могут использоваться генетические данные молекулярного анализа. При молекулярных исследованиях в основном используют локус субъединицы рибосомального гена 18S для родовых отличий пироплазм, поскольку эта часть гена достаточно устойчива к мутациям. Но другие rРНК гены, например, цитохрома b, и гены, кодирующие белки теплового шока, также использовались для родовой идентификации [6,18,21].
Установленные зоны распространения пироплазмоза собак перечислены в таблице 1; имеется всесторонняя и современная карта распространения клещевых инфекций собак Европы, Восточной и Юго-Восточной Азии [25]. Как и ожидалось, географическое распространение клещевых инфекций полностью связано с географическим распространением клещей-переносчиков этих заболеваний. Интересно отметить, что распространение Babesia gibsoni не связано с распространением каких-либо клещей, и быстрое глобальное распространение этого патогена связано с его уникальной возможностью прямой передачи от больной собаки к здоровой через укусы собак друг драгом, минуя какие-либо клещевые векторы [4,5].
На сегодняшний день Babesia vogeli является самой широко распространенной пироплазмой собак, что связано с широчайшим распространением вектора – коричневого собачьего клеща (Rhipicephalus sanguineus). Babesia vogeli распространена повсеместно, в тропической и субтропической области, а также и в более прохладных широтах, где кроме Babesia vogeli распространена другая большая бабезия – Babesia canis. Такое распространение может привести к микст-инфекциям (sensu strictu). Babesia canis передается Dermacentor spp. и имеет все более и более широкое распространение в Центральной Европе, тогда как совсем недавно считалось, что распространение ограничено Францией.
Babesia rossi является другой бабезией, распространенной в Африке (вместе с B. vogeli и B. gibsoni). Первоначально этот агент был выделен только в Южной Африке, но на сегодняшний день есть сообщения о его выделении из других регионов Африканского континента, включая Нигерию [26] и Судан [27], где его распространяет клещ Haemaphysalis spp., являющийся энзоотичным для этих мест.
Среди малых пироплазм наибольшее географическое распространение несомненно у B. gibsoni, азиатский штамм. Методом молекулярной идентификации он был обнаружен в различных южных, восточных и юго-восточных азиатских странах. Получил наибольшее распространение в тех странах, где практикуются незаконные собачьи бои.
ДИАГНОСТИКА БАБЕЗИОЗА
До сегодняшнего дня в России световая микроскопия остается единственным методом диагностики бабезиоза у собак. Мы на основании световой микроскопии можем выделить тяжелое течение заболевания, выявить моноцитоз. Пироплазмы могут определяться как внутри эритроцитов, так и свободно, а также внутри макрофагов. Как мы считаем, здесь они оказываются в результате фагоцитоза пораженных эритроцитов.
Судить о тяжести течения по результатам световой микроскопии можно только по степени паразитемии, анемии и моноцитоза, но без клинических параллелей эти данные имеют невысокую ценность.
По данным нескольких авторов, предел чувствительности световой микроскопии приблизительно 0,001 % зараженных паразитами эритроцитов. Методом ПЦР можно обнаружить паразитов при паразитемии 50 бабезий в 1 мл крови[35] или 9 паразитов в 1 микролитре [39]. Все же, несмотря на высокую чувствительность, ПЦР будет давать отрицательные результаты, если в пределах образца не окажется ни одного паразита. Как показывает практика, ложноотрицательные результаты могут отмечаться при хроническом бабезиозе, и это очень важно иметь в виду, когда анализ проводится животным с хроническим течением, на носительство пироплазм и у бродячих животных. Группой авторов была проверена чувствительность ПЦР [41,42] в комплексном исследовании. При этом учитывались [42] клинические параметры, гематологические исследования, серологический титр. Присутствие ДНК бабезий определялось методом ПЦР каждый день после экспериментального заражения. В исследовании приняли участие 3 собаки (n = 3) после полного клинического выздоровления, оцененного по клиническим признакам, на фоне отсутствия увеличения селезёнки, нормальной геммограммы и отсутствие пироплазм при световой микроскопии на 50 день после пика паразитемии.
Во время этого периода у клинически здоровых собак была обнаружена ДНК бабезий. Данное исследование показывает очень низкий уровень обнаружения ДНК методом ПЦР, возможно, сравнимый с хроническим пироплазмозом.
Возможность ПЦР-диагностики в обнаружении ДНК пироплазм при хроническом течении заболевания можно улучшить, проверяя не один, но несколько образцов крови от «подозреваемой собаки», кроме того, в такой ситуации наиболее ценным является одновременное определение титров антител на бабезии[42,43].
Иммуноферментный анализ на протяжении последних 30 лет был самым распространенным тестом на бабезиоз собак. [44,45]. Однако неудовлетворительная специфика из-за перекрестных реакций между Babesia spp. и другими микроорганизмами apicomplexan вносила субъективность в окончательные результаты исследования и мешала крупномасштабному применению этих методик. Надо сказать что эти коллизии обошли Российскую федерация, поскольку в ней наборы для диагностики бабезиоза серологическими и иммуноферментными методами так и не появились.
Клиническое течение бабезиоза
Тяжесть течения бабезиоза у собак и кошек колеблется от субклинической инфекции, развития невыраженной анемии до очень тяжелого течения заболевания с развитием синдрома мультиорганного расстройства и смерти. Факторами, определяющими тяжесть течения, является вид пироплазмы, вызвавшей заболевание, порода собаки, а также особенности физиологического состояния животного, такие как возраст, иммунный статус, наличие микст-инфекций, а также перморбидное состояние животного. Все виды пироплазм могут вызвать лихорадку, анорексию, спленомегалию, анемию и торомбоцитопению. Прямое повреждение и разрушение паразитом эритроцитов хозяина, снижение осмотической резистентности зараженных эритроцитов, окислительное и вторично иммунное повреждение мембран эритроцитов и как результат – внутрисосудистые и внесосудистые геморрагии.
Особенности клинического течения
Клинические особенности бабезиоза были рассмотрены с разных сторон [1-3]. При длительном наблюдении выявлено, что из всех больших пироплазм Babesia vogeli является наименее патогенной, по крайней мере, у взрослых собак, и вызывает самые мягкие формы пироплазмоза, часто развиваются хронические формы заболевания. А самой патогенной пироплазмой является Babesia rossi в Африке [1,30,31].
У собак, зараженных Babesia rossi, часто развиваются различные осложнения, такие как гепатопатия и иммунооблусловленный гемолиз, что утяжеляет течение заболевания, но не вызывает смерть, если должным образом проводится терапия. А такие осложнения как ДВС, энцефалиты, острая почечная недостаточность и отек легких требуют ранней, агрессивной и интенсивной терапии, при этом прогноз часто остается плохим[32]. Напротив, пироплазмоз, вызываемый Babesia vogeli, часто протекает субклинически, но у щенков в возрасте до 3-4 месяцев заболевание может быть фатальным. Кроме того, такой пироплазмоз протекает тяжело у собак с иммунодепрессией, получающих химиотерапию по поводу онкологических заболеваний, у собак после хирургических вмешательств, особенно после спленэктомии.
Тяжесть течения пироплазмоза, вызванного Babesia canis, Babesia gibsoni, Theileria annae и Babesia conradae, колеблется от умеренного до тяжелого, но может наблюдаться широкий диапазон тяжести клинического состояния и осложнений, в зависимости от индивидуальный особенности животного.
Babesia conradae, как считают многие исследователи, более патогенна, чем B. gibsoni, приводит к более высокой паразитемии и выраженной анемии [14]. В Испании инфекция, вызванная Theileria annae, была связана с выраженным гемолизом и азотемией [16]. Неклассифицированная Babesia sp. в Северной Каролине была связана с неопределенными клиническими признаками, такими как летаргия, анорексия, пигментурия и умеренная лихорадка. Данные признаки были более выражены у спленэктомированных собак [54]. Результаты лабораторных исследований отражали умеренную анемию и выраженную тромбоцитопению, которую до этого наблюдали при инфекции, вызванной Babesia vogeli [54]. Были проведены гистологические исследования, которые показали, что данные пироплазмы способны вызывать гипоксическое повреждение почек (гипоксическая и гемоглобинурическая нефропатия) в виде тубулярных изменений, и гломерулонефрит по различным механизмам [55].
Клиникопатoлогическое исследование собак, пораженных Theileria annae Северо-Западе Испании, показало, что у 36% собак (n = 58) отмечалась азотемия, и у этих собак смертность была в 10 раз выше, чем у тех животных, у которых не отмечалась азотемия. [56]. К сожалению, в этих исследованиях не приведены данные, показывающие корреляцию тяжести заболевания с выраженностью азотемии, но высокий белок в моче, повышенный креатинин, гипоальбуминемия и гиперхолестеринемия у больных собак заставили авторов предположить, что наиболее вероятной причиной поражения почек у собак при инфекции Theileria annae является гломерулонефрит [56]. Вместе с тем исследования уровня азотемии у собак, зараженных B. rossi, показали, что уровень креатинина и мочевины не являлся прогностическим показателем возникновения острой почечной недостаточности с плохим прогнозом [57,58]. В недавних исследованиях эндокринных маркеров болезни установлено, что отмечается корреляция между высокой смертностью собак, больных пироплазмозом, вызванным B. rossi, и высоким уровнем кортизола и АКТГ, при одновременно низком уровне T4 и fT4 [59].
Хронический бабезиоз (пироплазмоз) собак
Клинические последствия хронического бабезиоза неясны. Имеются сообщения о том, что у большинства собак после незначительных клинических проявлений заболевания развивается преиммунное состояние, которое теоретически может закончиться иммунообусловленными осложнениями или развитием клинического заболевания в более позднее время. Вместе с тем хроническая инвазия может не иметь вообще никаких последствий для собак, а в неблагополучных районах даже приводить к устойчивости животных к пироплазмозу [60]. Вместе с тем есть данные, что у собак участвующих в боях происходи обострение хронического (или латентного) бабезиоза вызванного B. gibsoni. При этом у собаки развивается анемия и вялость, при лабораторном исследовании тромбоцитопения а тесты на B. gibsoni становятся положительными, даже если до этого давали отрицательный результат. После непродолжительного лечения наступает ремиссия до следующего серьезного стресса. Несколько таких периодов как правило приводит к тяжелому повреждению почек с развитием аутоиммунных гломерулонефритов различной морфологической формы.
Такие собаки способны заражать своих соперников по собачьим боям, в связи с чем, многие страны (например, Новая Зеландия) рассматривают вопрос об ограничении ввоза собак, носителей бабезий.
Терапия бабезиоза
Наибольшие трудности у ветеринарных специалистов возникают в терапии хронического бабезиоза. Хронический бабезиоз может быть вызван любой бабезией, но наиболее часто его вызывает B. gibsoni.
Имидокарба дипропионат и диминазин ацетурат являются широко используемыми интипироплазменными препаратами. Но в течение многих лет использовались и другие препараты с различным терапевтическим эффектом, например, такие как квинурониума сульфат, трипан синий, пентамидин, фенамидин, парваквон (quinuronium сульфат, trypan синий, pentamidine, phenamidine и parvaquone).
В разных странах регистрационные комитеты ограничили применение многих из этих препаратов, так как некоторые из них, особенно diamidine производная diminazine, ассоциированы с высокой токсичностью и многими побочными эффектами. В лучшем случае эти препараты приводили к улучшению клинических признаков и редко – к элименации возбудителя из организма собаки.
Хорошие результаты при лечении пироплазмоза, вызванного маленькими пироплазмами, особенно B. gibsoni, были получены при применении – Clindamycin в дозе 25 мг/кг каждые 12 часов.
Данный препарат уменьшал паразитемию, при этом улучшались морфологические показатели в экспериментальном исследовании с заражением собак. Но препарат не удалял пироплазм из организма, и паразитемия наблюдалась еще на 108 день после обработки [61].
Сообщается об экспериментальном заражении и терапии 4 экспериментальных собак. Исследователи добились излечения собак, зараженных B. gibsoni. Предварительная терапия
diminazine в комбинации с
clindamycin, metronidazole (15 мг/кг каждые 12 часов) и
доксициклин (5 мг/кг каждые 12 часов) [62].
Успешной же оказалась терапия этих собак по следующему протоколу:
azithromycin (10 мг/кг каждые 12 часов) и
atovaquone (13.3 мг/кг каждые 8 часов) в течение 10 дней.
Эффективность лечения определялась по нормализации клинических признаков и отсутствию B. gibsoni ДНК в периферической крови. Десятидневный курс лечения заболевания, вызванного B. gibsoni, сопровождался клинической эффективностью и отсутствием побочных эффектов[41]. Вместе с тем цена на atovaquone ограничивает применение этого препарата, особенно там, где он больше всего нужен, – в азиатских странах. Более дешевые формы atovaquone с proguanil вызывают тяжелые побочные эффекты со стороны ЖКТ у собак.
К сожалению, эта комбинация препаратов также не приводит к выздоровлению у некоторых собак, при этом быстро возникает устойчевость к atovaquone, вызванная мутацией гена b-цитохрома [42,63].
Проводятся лабораторные испытания различных вытяжек из тропических растений для использования их как противобабезиозных средств, но пока никаких клинических данных по этим вопросам не сообщали [64-66]. Пептид, полученный из вытяжки клещей Haemaphysalis longicornis, уменьшал паразитемию у мышей при пирплазмозе, вызванном B. microti, и убивал B. gibsoni непосредственно в клещах [67].
Профилактировать пироплазмоз, как и любое другое векторное заболевание, проще всего, не допуская нападения клещей на собак, но достичь этого практически невозможно, особенно в эндемичных районах.
Несколько препаратов были исследованы с целью их профилактического применения против бабезий, и ни один не дал надежных результатов. Как наиболее распространенный применялся имидокарба (imidocarb dipropionate) в дозе 6 мг/кг – однократная доза, которая защищает собак от B. canis до 8 недель [68], его действие усиливается при одновременном применении доксициклина в дозе 5 мг/кг/ в день, особенно против высокопатогенных B.canis. [69].
Стереотипы и реальность
Бабезиоз собак остается важной клинической проблемой, несмотря на серьезные достижения последних лет в понимании патогенеза этого заболевания. Остаются нерешенными проблемы передачи инфекции и ее патофизиологического механизма, много нерешенных вопросов в диагностике заболевания и терапии этой инвазии, данное заболевание бросает вызов ветеринарам всего мира.
В настоящее время выделены неклассифицированные возбудители заболевания, не до конца выявлен ареал распространения, который, по всей видимости, будет продолжать расширяться из-за международного движения собак и расширения ареала клещей. В настоящее время в Ростовской области диагноз на бабезиоз собак с учетом видовой специфики и выявления носительства проводит «Ветеринарный диагностический центр Вита».
Анализ на пироплазмоз и
другие инфекции у собак и кошек в
Ростове-на-Дону и Ростовской области:
Ветеринарный диагностический центр Вита
